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原发性肝癌的治疗方法有哪些？-11

发表日期：2023年3月24日共浏览96 次【编辑录入：中华旅游网】
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(1)肝癌的自杀基因治疗：
①自杀基因治疗的机制：人们在早期的研究中发现，将一些具有特殊功能的病毒或细菌的基因，转导至哺乳动物细胞后，它们的表达产物能使原先对细胞无毒或毒性极低的药物转变为毒性产物，导致这些细胞“自杀”的相关基因称为“自杀基因”(Suicide gene)。将自杀基因作为目的基因应用于治疗即称为自杀基因治疗。因自杀基因表达产物一般是能将无毒性药物前体转变为毒性产物的酶，自杀基因治疗亦称为病毒介导的酶/药物前体疗法(virus-directed enzyme-prodrug therapy，VDEPT)。目前，在肝癌基因治疗研究中应用最多的自杀基因是TK(胸腺嘧啶脱氧核苷酸酶)基因和CD(胞嘧啶脱氨酶)基因，前者多来源于单纯疱疹病毒(HSV)或水痘-带状疱疹病毒(VZV)，后者一般来源于大肠杆菌。HSV-TK将无毒性的抗病毒药如gancidovir(GCV)或acidovir(ACV)生成细胞毒的磷酸化复合物，这种复合物是一种DNA和RNA链合成的终止子，能特异性杀伤分裂期肿瘤细胞。VZV-TK则可将6-甲基嘌呤阿拉伯糖核苷(araM)转变为毒性产物6-甲基嘌呤阿拉伯糖三磷酸核苷(ara ATP)，从而选择性杀伤表达VZV-TK的细胞。CD是一种发现于细菌和真菌的酶类，真核细胞中缺乏此酶。它可使胞嘧啶和5-氟胞嘧啶(5FC)分别生成尿嘧啶和5-氟尿嘧啶(5-FU)。氟尿嘧啶(5-Fu)是对人体无害的抗真菌药，氟尿嘧啶(5-Fu)则是常用的抗肿瘤药物。通过基因转移和使用组织特异性启动子的方法使CD基因仅在肝癌细胞中表达，继以氟尿嘧啶(5-Fu)治疗，能特异性杀伤肝癌细胞，正常细胞则不受影响。自杀基因治疗中除VDEPT发挥主要作用外，旁观者效应也起着重要的作用。此外，还可能有抗肿瘤免疫机制的参与，因为肿瘤局部可见大量巨噬细胞和CD4和CD8淋巴细胞的浸润现象。
②自杀基因治疗的设计策略：肝癌自杀基因治疗大致包括以下几步：
A.构建携带自杀基因的重组病毒载体。
B.目的基因的转导，活体外通过将病毒与肝癌细胞株共同培养获得，在活体内则是在注入癌细胞建立动物模型后，再直接在肿块内注射相应的病毒载体。
C.使用一定的方法检测转导效率，如用ELISA法检测酶活性，PCR法测基因表达产物，免疫组化法计数转导细胞等。
D.转导自杀基因后继以GCV、ACV或氟尿嘧啶(5-Fu)等药物治疗，观察肝癌细胞株或肿块的生长情况、形态变化等。
常用于肝癌自杀治疗的病毒载体有两类：反转录病毒和腺病毒，它们一般是复制缺陷型病毒，各有其优缺点。反转录病毒只感染分裂期癌细胞，其基因组整合入宿主染色体中，但滴度低，转染效率不高，且可能产生有复制能力的病毒，存在潜在的致癌危险。腺病毒可感染非分裂细胞，其滴度和感染效率均较高，感染时不整合到宿主染色体中，故没有致癌的潜在危险，因此腺病毒已日益广泛地应用于肝癌的自杀基因治疗中。众所周知，大部分肝癌AFP水平增高，构建的病毒载体如果包含有AFP转录调控序列，则只有AFP阳性的癌细胞表达TK基因或CD基因，继以GCV或5-FC治疗后，可高度特异性地杀伤肝癌细胞，这种策略适合于腺病毒和反转录病毒，已被不少学者所采用。有一种值得注意的趋向是自杀基因联合疗法，它可能有利于充分发挥几种基因疗法的协同作用。Chen等分别以二联法(HSV-TK+IL-2)和三联疗法治疗小鼠肝脏转移性结肠癌，证实较单一疗法为佳。IL-2局部浓度的升高可短暂促进肿瘤特异性T淋巴细胞-CD8 细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的增殖，CSF则激活抗原提呈细胞，延长CTL增殖反应，自杀基因与细胞因子的协同作用使抗肿瘤的反应持续存在。
③自杀基因治疗的旁观者效应：不少学者在研究中观察到一种有趣的现象，称为“旁观者效应”(bystander effect)，也有人称为“代谢协同”，“相邻细胞杀伤效应”等。当将转导了自杀基因的肿瘤细胞与其未转导的父系细胞共同培养时，不仅转导细胞被杀死，相邻的未转导细胞也可被杀死，体外培养的转导细胞仅占细胞总数的10%时，便可观察到明显的旁观者效应，在活体内有同样类似效应。该效应明显扩大了自杀基因的杀伤作用，在相当程度上弥补了转导效率低的问题，对恶性肿瘤的治疗有着十分重要的意义。
旁观者效应的机制尚不十分清楚，Kuriyama等对此作了较深入的研究。他们证实细胞溶解物并无细胞毒性，旁观者效应在细胞密切接触时最明显，提示由缝隙连接介导的代谢协同起了主要作用，缝隙连接为细胞间离子和小分子物质的双向交换提供了一条通道，这样GCV的毒性代谢产物和某些细胞毒因子便可以通过它进入未转导细胞内，发挥杀伤效应，这已被放射性标记技术证实。活体内旁观者效应的机制除前述因素外，可能还与HSV-TK和GCV诱导的抗肿瘤免疫反应有关。Freeman等观察到转导了HSV-TK基因的肿瘤细胞在形态上有细胞皱缩、染色质浓缩、囊泡形成等变化。因细胞膜不能通过GCV磷酸化复合物，可能是通过凋亡之囊泡传递毒性产物，也可能经缝隙连接转移，或者凋亡触发某些水解酶和其他类似功能的酶而转移至未转导细胞中。CD基因介导的旁观者效应与TK基因有所不同，细胞间直接的密切接触并非必需的。5-Fu可通过细胞膜进入邻近肝癌细胞发挥杀伤作用。在活体内当转导细胞只占肝癌细胞总数的百分之几时，腺病毒介导的CD基因治疗便能有效地抑制裸鼠肝癌的生长。